Clonare un fungo con il bisturi

Abbiamo già visto come clonare un fungo con la siringa: si tratta dell'unica tecnica di clonazione che ci permette di creare una LC pulita senza glove-box; tuttavia, è piuttosto difficile da attuare (specie con funghi dalla carne elastica come il Pleurotus ostreatus), e spesso non dà i risultati sperati. Adesso che però abbiamo costruito una glove-box, possiamo utilizzare un altro sistema, decisamente più semplice. Il meccanismo è analogo a quello che già conosciamo: si tratta semplicemente di riuscire ad inserire un frammento di tessuto dentro al barattolo di acqua e miele sterilizzati. Invece della siringa però useremo un bisturi per ritagliare il pezzetto di fungo, e lo inseriremo nel barattolo semplicemente aprendo il coperchio. Lavorando in glove-box è infatti possibile evitare che eventuali contaminanti entrino nel barattolo al momento dell'apertura. Il tessuto dovrà essere prelevato dalla parte interna del fungo, dopo averlo rotto a metà (senza tagliarlo). Ho girato un video per facilitare la comprensione di questa tecnica. L'attrezzatura necessaria è composta da un fungo da clonare (nel mio caso Pleurotus ostreatus), due bisturi avvolti in carta stagnola e sterilizzati per 15 minuti in pentola a pressione, ed un barattolo di acqua e miele al 4%, preparando secondo l'apposita guida.
La prima cosa da fare, è pulire accuratamente la glove-box con alcool, compresi gli angoli, il coperchio e le maniche. Le pareti e la base devono essere lasciati leggermente umidi, così da impedire che spore indesiderate possano muoversi liberamente. Fatto questo, mettiamo dentro la nostra attrezzatura, chiudiamo il coperchio ed aspettiamo 15 minuti, per sicurezza. Una volta trascorsi, possiamo iniziare: indossiamo un paio di guanti di lattice, laviamoli bene con alcool, e mettiamo le mani dentro alla nostra glove-box. Scartiamo il primo bisturi, ed incidiamo leggermente il fungo, ma senza andare a fondo (la lama non deve toccare la parte centrale): poi lo spezziamo con le mani, stando sempre bene attenti a non toccare la parte interna. Scartiamo l'altro bisturi, preleviamo un frammento dalla parte centrale del fungo e lo mettiamo dentro al barattolo, aprendo il coperchio. Come potete vedere, è molto più semplice della clonazione con siringa.
Una volta completata l'operazione, mantenete il barattolo al buio ad una temperatura di 20-25°. Se tutto va bene, la crescita dovrebbe risultare visibile entro una settimana. Se il liquido diventa lattiginoso, buttate via e ricominciate da capo.
Buon divertimento ;)

P.S. Per ovvie ragioni ho ripreso il tutto senza mettere il coperchio, ma voi ovviamente lo dovrete mettere ;)